血球计数板、血细胞计数板

血球计数板（改良牛鲍计数板）

  用优质厚玻璃制成。每块计数板由H形凹槽分为2个同样的计数池。计数池两侧各有一支持柱，

  将特制的专用盖玻片覆盖其上，形成高0.10mm的计数池。计数池画有长、宽各3.0mm的方格，分

  为9个大方格，每个大格面积为1.0mm.容积为0.1mm（ul），其中，中央大方格用双线分成25个中

      方格，位于正中及四角5个中方格是红细胞计数区域，用单线划分为16个小方格。四角的4个大方格

  是白细胞计数区域，用单线划分为16个中方格。根椐国际标准局（NBS）规定，大方格每边长度允

  许误差为±1%。

编辑本段基本构造

  血球计数板

  血球计数板是一块特制的厚型载玻片，载玻片上有四个槽构成三个平台。中间的平台较宽，其中间又被一短横槽分隔成两半，每个半边上面各刻有一小方格网，每个方格网共分九个大方格，中央的一大方格作为计数用，称为计数区。计数区的刻度有两种：一种是计数区分为16个中方格（大方格用三线隔开），而每个中方格又分成25个小方格；另一种是一个计数区分成25个中方格（中方格之间用双线分开），而每个中方格又分成16个小方格。但是不管计数区是哪一种构造，它们都有一个共同特点，即计数区都由400个小方格组成。 计数区边长为1mm，则计数区的面积为lmm2，每个小方格的面积为1/400mm2。盖上盖玻片后，计数区的高度为0.1mm，所以每个计数区的体积为0.1mm3，每个小方格的体积为1/4000mm3。

  使用血球计数板计数时，先要测定每个小方格中微生物的数量，再换算成每毫升菌液（或每克样品）中微生物细胞的数量。

编辑本段使用方法

  血球计数板

  1. 视待测菌悬液浓度，加无菌水适当稀释（斜面一般稀释100倍），以每小格的菌数可数为度。 2．取洁净的血球计数板一块，在计数区上盖上一块盖玻片。

  2．将菌悬液摇匀，用滴管吸取少许，从计数板中间平台两侧的沟槽内沿盖玻片的下边缘摘入一小滴（不宜过多），让菌悬液利用液体的表面张力充满计数区，勿使气泡产生，并用吸水纸吸去沟槽中流出的多余菌悬液。也可以将菌悬液直接滴加在计数区上（不要使计数区两边平台沾上菌悬液，以免加盖盖玻片后，造成计数区深度的升高），然后加盖盖玻片（勿使产生气泡）。

  3．静置片刻，使细胞沉降到计数板上，不再随液体漂移。将血球计数板放置于显微镜的载物台上夹稳，先在低倍镜下找到计数区后，再转换高倍镜观察并计数。由于生活细胞的折光率和水的折光率相近，观察时应减弱光照的强度。

  4．计数时若计数区是由16个大方格组成，按对角线方位，数左上、左下、右上、右下的4个大方格（即100小格）的菌数。如果是25个大方格组成的计数区，除数上述四个大方格外，还需数中央1个大方格的

  血球计数板

菌数（即80个小格）。为了保证计数的准确性，避免重复计数和漏记，在计数时，对沉降在格线上的细胞的统计应有统一的规定。如菌体位于大方格的双线上，计数时则数上线不数下线，数左线不数右线，以减少误差。即位于本格上线和左线上的细胞计入本格，本格的下线和右线上的细胞按规定计入相应的格中。见右图：即本格中计数细胞为3个。6．对于出芽的酵母菌，芽体达到母细胞大小一半时，即可作为两个菌体计算。每个样品重复计数2-3次（每次数值不应相差过大，否则应重新操作），按公式计算出每mL（g）菌悬液所含细胞数量。

  5．测数完毕，取下盖玻片，用水将血球计数板冲洗干净，切勿用硬物洗刷或抹擦，以免损坏网格刻度。洗净后自行晾干或用吹风机吹干，放入盒内保存。

编辑本段红细胞计数公式

  红细胞数/L=N*25/5*10*10^6*200

  N为：五个中方格的RBC总数

  N*25/5为：中央大方格RBC总数（即：0.1mm（ul）的RBC总数）

  N*25/5*10为：1mm（ul）RBC总数

  N*25/5*10*10^6为：1L的RBC总数

  *200为血液的稀释倍数

  公式简化后：红细胞数/L=N/100*10^12

编辑本段测微尺的构造和使用方法

  测微尺分目镜测微尺和物镜测微尺.目镜测微尺用来测量视野中的物体长度;物镜测微尺是标准长度,用来标定目镜测微尺.

  (1)目镜测微尺的构造 目镜测微尺是一块圆形玻片,其中央刻有精确的刻度,通常是将5mm划分为50格,实际每格等于100μm.刻度的大小随着使用的目镜和物镜的放大倍数而改变,用前必须用物镜测微尺来标定.

  (2)物镜测微尺的构造 物镜测微尺为一块特制的载玻片,其中央有一小圆圈.圆圈内刻有分度,将长1mm的直线等分为100小格,每小格等于10μm.

编辑本段目镜测微尺的标定

  (1)取下目镜,旋下目镜上的透镜,将目镜测微尺放人目镜的中隔板上,使有刻度的一面朝下,再旋上透镜,并装入镜筒内.

  (2)将物镜测微尺置于显微镜的载物台上,使有刻度的一面朝上,同观察标本一样,使具有刻度的小圆圈位于视野中央.

  (3)先用低倍镜观察,对准焦距,待看清物镜测微尺的刻度后,转动目镜,使目镜测微尺的刻度与物镜测微尺的刻度相平行,并使两尺的左边第一条线相重合,再向右寻找两尺的另外一条重合线.(4)记录二条重合线间的目镜测微尺的格数和物镜测微尺的格数.

编辑本段计算方式

  (1)目镜测微尺每格长度=两个重叠刻度间物镜测微尺格数×10/两个重叠刻度间目镜测微尺格数

  (2)以同样方法,分别在不同倍率的物镜下测定测微尺上每格的实际长度.

  (3)如此测定后的目镜测微尺的尺度,仅适用于测定时所用的显微镜的目镜和物镜的放大倍数.若更换物镜,目镜的放大倍数时,必须再进行校正标定.

编辑本段血球计数板的构造和使用

  血球计数板是由一块比普通载玻片厚的特制玻片制成的.玻片中有四条下凹的槽,构成三个平台.中间的平台较宽,其中间又被一短横槽隔为两半,每半边上面,刻有一个方格网.方格网上刻有9个大方格,其中只有中间的一个大方格为计数室,供微生物计数用.这一大方格的长和宽各为1mm,深度为0.1mm,其体积为0.1mm3.

  计数室通常有两种规格.一种是大方格内分为16中格,每一中格又分为25小格;另一种是大方格内分为25中格,每一中格又分为16小格.但是不管计数室是哪一种构造;它们都有一个共同的特点,即每一大方格都是由16×25=25×16=400个小方格组成,见图.

编辑本段血球计数板的使用

  以计数酵母菌为例

  (1)用血球计数板计数酵母菌悬液的酵母菌个数.

  (2)样品稀释的目的是便于酵母菌悬液的计数,以每小方格内含有4-5个酵母细胞为宜,一般稀释10倍即可.

  (3)将血球计数板用擦镜纸擦净,在中央的计数室上加盖专用的厚玻片.

  (4)将稀释后的酵母菌悬液,用吸管吸取一滴置于盖玻片的边缘,使菌液缓缓渗入,多余的菌液用吸水纸吸取,捎待片刻,使酵母菌全部沉降到血球计数室内.

  (5)计数时,如果使用16格×25格规格的计数室,要按对角线位,取左上,右上,左下,右下4个中格(即100个小格)的酵母菌数.如果规格为25格×16格的计数板,除了取其4个对角方位外,还需再数中央的一个中格(即80个小方格)的酵母菌数.

  (6)当遇到位于大格线上的酵母菌,一般只计数大方格的上方和右方线上的酵母细胞(或只计数下方和左方线上的酵母细胞).

  (7)对每个样品计数三次,取其平均值,按下列公式计算每1ml菌液中所含的酵母菌个数.

  3.计算公式

  (1)16格×25格的血球计数板计算公式:

  酵母细胞数/ml=100小格内酵母细胞个数/100×400×10四次方×稀释倍数

  (2)25格x16格的血球计数板计算公式:

  酵母细胞数/ml=80小格内酵母细胞个数/80×400×10四次方×稀释倍数

  4.血球计数板的清洁

  血球汁数板使用后,用自来水冲洗,切勿用硬物洗刷,洗后自行晾干或用吹风机吹干即可。通过镜检观察每小格内是否残留菌体或其他沉淀物.若不干净,则必须重复清洗直到干净为止.